一、芽胞杆菌

        芽胞杆菌属（Bacillus），通常为革兰氏阳性菌，大多数有动力，也有无动力的菌株，例如炭疽芽胞杆菌。该属细菌具有独到的保命手段，就是能够产生对不利条件具有特殊抵抗力的芽胞，芽胞外壳就像一层“防弹衣”，能抵抗外界不利因素，有利于自己生存，因此该菌属得名芽胞杆菌属。芽胞杆菌因其强大的生命力，能够广泛存活于土壤、水、空气以及动物肠道等处，是与我们人类生活息息相关的一种微生物。

二、蜡样芽胞杆菌检验要点

        既然提到了芽胞杆菌，在食品微生物检测领域，最受关注就是蜡样芽胞杆菌。一些蜡样芽胞杆菌在生长繁殖的过程中会产生毒素，致人呕吐、腹泻，因此需要加以控制。我国曾出台过多部与蜡样芽胞杆菌检验相关的文件。例如：2022年3月7日起正式实施的GB 31607－2021《食品安全国家标准　散装即食食品中致病菌限量》，规定了以米为主要原料制作的热处理散装即食食品和部分或未经热处理的散装即食食品中蜡样芽胞杆菌的限量。另外，WS/T 82－1996《蜡样芽胞杆菌食物中毒诊断标准及处理原则》规定当食源性疾病发生时，重点检测剩米饭、米粉、甜酒酿、剩菜、甜点心及乳、肉类等食品。现行强制性标准GB 4789.14－2014《食品安全国家标准　食品微生物学检验　蜡样芽胞杆菌检验》，主要利用生化鉴定作为蜡样芽胞杆菌的判断依据。在这个标准中，动力试验结果很难判断，尤其是动力阴性的蕈状芽胞杆菌的绒毛状生长，很容易造成干扰。

        检验员最常提出的问题就是：什么样才能判定为动力阳性？绒毛状生长是什么样？谁是芽胞杆菌中的“运动健将”？

三、标准中的动力试验

        我们先看看GB 4789.14－2014《食品安全国家标准　食品微生物学检验　蜡样芽胞杆菌检验》规定的动力试验结果。

        当年因为种种原因，GB 4789.14－2014《食品安全国家标准　食品微生物学检验　蜡样芽胞杆菌检验》第三章培养基和试剂的3.6和3.11条款同时列出了两种动力培养基，并且在附录A.6和A.11中，分别规定了动力培养基的技术要求，两种培养基的成分、制法有明显不同（标准中存在错误）。鉴于附录A.6描述更为详尽，同时明确规定了试验方法（此条款规定30 ℃±1 ℃培养48 h±2 h，与4.3.2.2条款规定动力试验30 ℃培养24 h也不一致，建议按照30 ℃±1 ℃培养48 h±2 h进行操作 ），所以，建议越看标准越迷糊的检验员，开展动力试验的时候，按照附录A.6进行即可。

图1  GB 4789.14－2014的第3.6条款中提到的动力培养基成分、制法与方法

图2  GB 4789.14－2014的第3.11条款中提到的动力培养基成分、制法

四、动力试验结果观察

        接下来，检验员们就一起看看在按照GB 4789.14－2014《食品安全国家标准　食品微生物学检验　蜡样芽胞杆菌检验》规定的条件下，穿刺专门用于蜡样动力试验的“M165-动力培养基（蜡样）” 30 ℃±1 ℃培养48 h±2 h后的结果吧。

1.阴性对照

        开展生化试验时，最好同时有阴性对照，我们用CMCC 51572福氏志贺氏菌作为阴性对照。

图3 CMCC 51572福氏志贺氏菌（阴性对照）动力试验结果

        培养后，CMCC 51572福氏志贺氏菌仅沿着穿刺线生长，穿刺线整体比较致密，边缘轮廓清晰，很明显看出细菌完全挤在了穿刺线内部生长，没有任何向外扩散的趋势，且穿刺线以外的培养基，非常澄清透亮。

2.蜡样芽胞杆菌

图4 蜡样芽胞杆菌动力试验与阴性结果

        蜡样芽胞杆菌的“动力”为大多数阳性，在这里选取了两株不同编号的蜡样芽胞杆菌进行试验。与阴性对照相比，两株蜡样芽胞杆菌均有沿穿刺线向外扩散生长的趋势，穿刺线为明显“膨胀”的形状。在穿刺线以外的培养基，有“磨砂”质感，透光看会显得“雾蒙蒙”，完全不同于阴性对照培养基的“澄清透亮”质地，此时可以判定为动力阳性。

3.苏云金芽胞杆菌

图5 苏云金芽胞杆菌动力试验与阴性结果的对比

        苏云金芽胞杆菌的动力也是大部分菌株阳性。CICC 22945 苏云金芽胞杆菌有沿穿刺线向外扩散生长的现象，在穿刺线以外的培养基显得“雾蒙蒙”，可判定为动力阳性。

4.蕈状芽胞杆菌

图6 蕈状芽胞杆菌动力试验结果与动力阳性、阴性结果的对比

        结合标准中提到的几株芽胞杆菌的试验结果，在这里做一下总结。没有动力的细菌，它只能在穿刺线内有限的空间内生长，半固体琼脂会阻止其向外扩散，因此其沿穿刺线生长后只是形成细细的一条线。有动力的细菌，在接种半固体培养基后，就会沿穿刺线向四面八方运动，看起来穿刺线是变粗变大了。蕈状芽胞杆菌具有“绒毛状”生长的特性，图中显示半固体琼脂并没有阻挡蕈状芽胞杆菌的生长，它沿穿刺线横向生长出了无数且致密的丝状生长线，看起来类似“绒毛”的质感，这种结果并非来自细菌鞭毛的动力，而是该菌的分裂生长特性。

        在这里，小编再跟检验员们分享一个观察动力试验的小经验，在观察半固体培养基的时候，除了穿刺线的形状，我们还可以注意观察安瓿瓶中在穿刺线以外其他部分的培养基是否还有 “澄清透亮”质地，对于动力阳性菌株，其大概率培养基会变得模糊不透明，而阴性菌株，培养基则会与穿刺前一样透明，如蕈状芽胞杆菌绒毛状的四周，培养基依然是澄清透明的，故判定其动力为阴性。

        在标准要求之外，我们也开展了其他常见芽胞杆菌菌株的动力试验，供大家参考。

5.枯草芽胞杆菌与短小芽胞杆菌

图7 枯草芽胞杆菌与短小芽胞杆动力试验结果

        枯草芽胞杆菌与短小芽胞杆菌虽然在动力培养基表面生长旺盛，但是沿穿刺线生长的菌苔非常薄弱，只能浅浅的看到一条穿刺线，这是因为枯草芽胞杆菌与短小芽胞杆菌是需氧菌，在琼脂内部氧气极少，所以不能很好的生长，从而看不到穿刺线，因此穿刺法不容易判断枯草芽胞杆菌与短小芽胞杆菌的动力。

6.地衣芽胞杆菌与萎缩芽胞杆菌

图8 地衣芽胞杆菌与萎缩芽胞杆动力试验结果

        其他芽胞杆菌，如地衣芽胞杆菌能看到扩散，且培养基变得半透明，是动力阳性。萎缩芽胞杆菌有特殊的颜色且看不到明显的扩散，培养基清晰透明，是动力阴性。

        看完上述芽胞杆菌的动力试验结果，各位检验员心中的疑惑解开了吗？