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简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程

发布时间: 2020-11-18

葡萄球菌属是革兰氏阳性球菌,因镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群,如串状葡萄,故称为葡萄球菌。葡萄球菌无鞭毛,不能运动。无芽胞,需氧或兼性厌氧,对营养要求不高。


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程


致病性的葡萄球菌多数能产生血浆凝固酶,而非致病性菌株一般不产生,因此,血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程


致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶:


一种是结合凝固酶,存在于菌体细胞壁上,可直接作用于血浆中纤维蛋白原,使其凝集成块,并附着于细菌表面,玻片法和试管法均可; 另一种称为游离凝固酶,是在菌体内生成后分泌至菌体外,被血浆中协同因子激活,形成葡萄球菌凝固酶类物质,使纤维蛋白原变为纤维蛋白,导致血浆凝固,适用于试管法。


为方便理解,请看下表:


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程


玻片法血浆凝固酶试验应用已久,医院临床实验室多采用此方法,此方法优点:快速、简单、易于操作。缺点:出现假阳性,对血浆的浓度,敏感性,特异性要求较高。而试管法的优点:结果稳定,可检测游离型凝固酶和结合型凝固酶。《GB 4789-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》中也采用了试管法。


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程

简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程


血浆凝固酶试验所需的试剂药品与菌株


1、实验药品:冻干血浆(CM304)、BHI肉汤(GCM917B/CM917B)、营养琼脂(GCM107/CM107)、无菌水。

2、血浆凝固酶对照菌株:阳性菌株:金黄色葡萄球菌   阴性菌株:表皮葡萄球菌。


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程


血浆凝固酶试验操作流程中的注意事项


1、 将在Baird-Parker平板上或血平板上的可疑菌落同时接种在5ml的BHI肉汤与营养琼脂,36℃±1℃,培养18-24h。 


注意事项

培养完成后,先观察BHI肉汤培养物的生长状态。如果出现生长状态不良,菌液浊度不够,需要用营养琼脂上的菌落重新接种BHI肉汤活化。


2、吸取0.5ml无菌水到CM304冻干血浆西林瓶中,摇匀使之溶解均匀,再加入上述新鲜BHI培养物0.2-0.3ml,混合均匀后放置36±1℃培养。 

注意事项

加入新鲜的BHI培养物,“新鲜”应理解为,培养物从培养箱取出后,立即进行试验。以保证培养物的酶活力良好。避免出现因取出一段时间后,因酶活力降低而引起的假阴性;加入培养物后要轻轻转动瓶身至混合均匀,不要采取剧烈摇晃的方式。


3、每间隔0.5h观察一次结果,直至6h结束,若出现凝固(凝固体积大于原体积一半)即待测菌血浆凝固酶为阳性,否则为阴性 。

注意事项

试验应每半小时观察一次,不可直接观察第6h后的结果。一些金葡菌能够产生蛋白酶来分解纤维蛋白,而出现先凝集而后消融的情况,保证每半小时观察一次,防止因观察不及时,而误判成假阴性。观察凝固情况时,采用将西林瓶缓慢倾斜或倒置的方式。不要采用摇晃的方式进行观察!!!当凝固体积大于原体积一半,判为阳性。


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程

结果判定常见情况分析


当遇到凝集现象不明显,对结果的判定产生疑问时,可参照阿加西老师的《有关金葡菌不得不说的事》里提到的方法,进行操作。先对试管的凝集程度进行评分。再进行判定。3+以上者判为阳性,1+、2+者,可将培养物重新培养后,再做一次血浆凝固酶实验。或采用其它方法对可疑菌株进行鉴定。


简述血浆凝固酶试验的原理与操作流程


参考文献


1、 GB 4789.10-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验

2、 阿加西.有关金葡菌不得不说的事

3、 陈俊, 陈伟, 林新华, et al. 葡萄球菌血浆凝固酶试验的探讨[J]. 中华临床医药杂志(北京), 2001, 22(3):7-8.

4、 许丽虹. 三种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的比较[J]. 医学信息, 2014, 000(006):193-194.

5、 Sperber W H,Tatini S R. Interpretation of the tube coagulase test for identification of Staphylococcus aureus.[J]. Applied microbiology,1975,29(4).



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