全球每年由沙门氏菌引起的胃肠炎病例约有九千多万例,导致约20万人死亡,其中85%病例是食源性的,常居食物中毒榜首。因此,肠杆菌科的沙门氏菌是一类重要的、全球性的人畜共患的食源性致病菌,其检测在畜禽健康、人类公共安全及食品安全等方面意义重大。
随着技术的进步,沙门氏菌鉴定虽然有多种新鉴定手段,如免疫学、分子生物学、基于细胞物理/化学特征的检测技术、生物传感器等检测技术,但目前限制最少、应用最广泛的还是传统的检测技术,以形态学观察、培养特征、生理生化特征、抗原特征的鉴别为主。
传统检测技术条件简单、技术成熟、假阳性率低,但存在检测时间长,准确度受操作人经验判断和菌活性影响等缺点,而沙门氏菌属包含2个种,含6个亚种,2579个血清型,具有多种生化组合特征,其生理生化特征鉴定受人员经验判断和菌活性影响最大,这也是沙门氏菌属传统生化鉴定的一大难点。
下面我们就沙门氏菌属传统生化鉴定流程、商品化试剂盒的使用,沙门菌及常见干扰菌生化鉴定现象,常见问题来为您解析这一操作步骤。
01 沙门氏菌属传统生化鉴定 流程
为帮助大家理顺流程,我们依据GB4789.4-2016标准,将沙门氏菌属的生化鉴定判定步骤简化如下图:
流程
其中,必须用到的生化试剂有五种:
三糖铁琼脂、赖氨酸脱羧酶、靛基质、尿素、氰化钾。
可能用到的生化试剂有三种:
甘露醇、山梨醇、ONPG
测试中分离的可疑单菌落经纯化后,每个菌株测试一组,以确认该菌是否为沙门氏菌属。
02 沙门氏菌传统生化鉴定商品化试剂盒 操作
为更方便、快速地完成沙门氏菌属的系列生化鉴定并判定,我们可以选购商品化套装生化试剂盒。
下面,我们以陆桥DBI-05沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒操作视频为大家演示:
https://v.qq.com/x/page/m3202nftgzu.html
视频指路牌:
经过培养、滴加附加试剂后,按下表判断各项生化试剂结果:
然后,参照01沙门氏菌属传统生化鉴定流程部分,判断该菌是否为沙门氏菌。
03 沙门氏菌及常见干扰菌生化鉴定 结果
典型(完全符合A1组合结果)的沙门氏菌生化结果为:
其他常见沙门及干扰菌生化结果见下表:
04 沙门氏菌传统生化鉴定 常见问题
在沙门氏菌传统生化鉴定过程中,我们还可能会遇到以下常见问题:
Q1:在三糖铁实验中,菌株产硫化氢变黑覆盖了斜面底层的颜色,该如何判定底层产酸还是产碱?
A1:测试菌株产硫化氢,可判定底层产酸变黄。
为更好地观察判定,可①减少接种量(先斜面划线,再留少量菌进行穿刺,注意不要穿刺到底部);②缩短培养时间(8h-18h)。
此外,还需要注意封膜保湿,防止斜面干缩导致结果误判。
Q2:生化鉴定使用的菌悬液浊度要求多少?
A2:生化鉴定套装为微量鉴定系统,对于菌悬液浓度有要求,使用0.5麦氏浊度进行接种,菌悬液浓度过大或者过小对实验结果的准确度有影响。
Q3:尿素酶变浅橙色,如何判定是阴性还是阳性?
A3:尿素酶黄色或橙色均判定为阴性,只有玫红色或红色才判定为阳性。
还有更多干制生化套装,欢迎您的关注和来电咨询。
参考文献
[1] Majowicz, Shannon E., et al.The global burden of nontyphoidal Salmonella gastroenteritis.
Clinical infectious diseases 50.6 (2010): 882-889.
[2] 黄欣迪,涂晓波,亓双,张恒.食源性致病菌的检测方法及其发展趋势[J].食品安全质量检测学报,2016,7(12):4794-4800.
[3] R.E.布坎南,N.E.吉本斯等.伯杰细菌鉴定手册(第八版)[M].北京:科学出版社,1984.
[4] GB4789.4-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验[S].
[5] 东秀珠,蔡妙英等.常见细菌系统鉴定手册[M].北京:科学出版社,2001.