GB 15979《一次性使用卫生用品卫生标准》发布于1996年，最新一版更新于2002年，随着今年新型冠状病毒疫情的侵袭，这个标准广受关注，而标准里对于绿脓杆菌的检测是很多检验人员关注和有所疑惑的。在这里，小王就这个标准里对绿脓杆菌检测的相关要点和大家分享一下。

一、绿脓杆菌简介

首先，我们先了解下绿脓杆菌。

绿脓杆菌，又称铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)，1882年由Gersard从伤口脓液中分离，是一种革兰氏阴性、好氧、呈长棒形的细菌，因感染后脓汁和浸出液等病料呈绿色，故此得名。

该菌最适宜的生长温度为30℃-37℃，42℃能生长，4℃不生长。大多数菌株能产生水溶性的绿脓菌素和荧光色素，可向培养基周围扩散而呈现蓝绿色，某些菌株也分泌一些暗红色素（具体可参考GB 8538-2016中对于铜绿假单胞菌可疑菌落鉴定的相关内容）。 

绿脓杆菌的革兰氏染色镜检照片

二、绿脓杆菌检验流程

接下来，我们来看一下GB 15979《一次性使用卫生用品卫生标准》中关于绿脓杆菌的检验流程：

第一步中，5mL样液加入到50mL SCDLP培养液中，35℃±2℃培养18h-24h。由于绿脓杆菌是需氧菌，所以在培养液表面生长旺盛，会形成一层薄菌膜，培养液呈黄绿色或蓝绿色。这点是很容易做到和看到的。

但第二步中，标准中描述：

其实，“挑取菌膜处的培养物划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂，培养后观察其菌落周围培养基略带粉红色”这一现象，很多检验人员都反馈看不到所谓的粉红色。小王用样品中分离的绿脓杆菌划线了十六烷三甲基溴化铵琼脂，平板现象如下：

从图中可以看出，十六烷三甲基溴化铵琼脂上的菌落周围没有出现粉红色，鉴于GB 8538-2016饮用天然矿泉水检测方法中对绿脓杆菌菌落形态的描述有蓝绿色、红褐色等多种颜色，小王认为，即便划线后培养基没有所谓的粉红色，也依然要继续进行后续的生化鉴定。因为多数研究表明，绿脓杆菌所产色素的颜色和培养基的成分相关。

三、绿脓菌素生化实验

在后续的生化鉴定实验中，小王认为操作上存在难度的，就是绿脓菌素实验了。那咱们就先看下标准中是如何对此实验进行描述的：

从标准中可以看出，加三氯甲烷后的操作只有充分振荡，而实际操作中，直接振荡的效果很差，即便是用接种环把上面的菌苔刮取后振荡，效果也依旧不佳。请看下图：

所以，各位小伙伴们在做此实验时候，就可以借鉴小王的操作啦！

至于其他生化实验，小王还是相信各位水平的，如果依然有不太明白的，那就联系陆桥技术小王！随时恭候您的提问。

参考文献

1.韩青松, 简永利, 涂宜强,等. 绿脓杆菌研究进展[J]. 畜牧与饲料科学, 2012(01):128-130.

2.GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准[S].

3.GB 8538-2016 食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法[S].