受寒潮影响，我国多地区出现大范围低温雨雪凝冻天气，户外低温，室内环境温度也随之受到较大影响。在ELISA检测工作中，实验室环境温度如何控制呢？检测过程中还有哪些注意事项……小编给您实战经验分享。

ELISA试剂盒检测技巧及经验分享

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测法具有敏感性高，特异性强，快速等特点，目前广泛应用于农兽药、真菌毒素残留检测。但该方法从加样、洗板、显色到读数步骤繁多，其中的每一步控制不好都可能影响检测结果的准确性。因此，在实际测定操作中一定要注意以下几点。

一、温度

1. 试剂盒回温

大多数ELISA检测试剂盒为冷藏（2℃-8℃）保存。从冰箱拿出来后，先不要急于打开试剂盒，要等试剂盒的温度平衡至室温且试剂盒盒表面无冷凝水。检测所用的试剂需充分混匀且彻底溶解后再用。

Tip：提前1~2小时取出试剂盒，放在室温中；或在预设25℃恒温培养箱中平衡30分钟~60分钟。

2. 环境温度的控制

实验室可采用以下措施控制温度：

1）实验室应配备温湿度表，且确保定期计量。

2）根据天气情况设定实验室空调制冷或加温功能，待室温稳定且无干扰的条件下再开始检测流程。

3）选用带温控装置的孵育仪器，如恒温孵育器、恒温培养箱、多功能酶标仪等。注意要提前开启预热。

Tip：大多数试剂盒加样后反应时间较短，环境温度对检测结果会有很大影响，所以控制好环境温度是保证试剂盒检测结果有效的重要因素。

3. 孵育

孵育时要保证温度均匀，防止挥发变干。孵育时使用封板膜，并置于暗处孵育。多块板一起实验时，要平放各板，不要叠放，避免温度扩散的不均匀性或边缘效应。

图1  ELISA试剂盒检测孵育中

二、剩余试剂的妥善保存

试剂盒恢复至室温后，取出要使用的酶标板孔，未使用的酶标板孔应及时放回铝箔袋，加入干燥剂，封紧封口，2℃-8℃冷藏保存。

Tip: 切忌将未完全平衡至室温的酶标板放回铝箔袋，因为此时由于温度差，酶标板上会有水汽，不利于稳定保存。

三、加样

1. 加样要快速准确，时间宜控制在 15 分钟内。

2. 如样品量较大，可分次完成实验，或将测样液置于预混微孔板中使用多通道移液器快速移取。

3. 如吸取同一试剂，可将试剂倒入V型加样槽中，使用多通道移液器快速移取。

Tip：在加样槽上套上一次性PE手套，再倒入检测用试剂，可以保证试剂完整性且不被污染。加样槽更换一次性手套后可继续下一种试剂的使用。

  四、手动洗板操作指南

 　  1. 当洗涤缓冲液有结晶析出时，可用手反复揉搓瓶体使结晶物充分溶解再配制。

2. 加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶。洗液应新鲜配制，以免被其他试剂污染，或染菌。

3. 加好洗液后轻轻摇动微孔板。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水纸上拍干，选用无粉尘和碎屑的优质吸水纸。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁。

4. 不能让样品干太久。酶标板拍干后立即做后续的加液。

   Tip：拍板用的吸水纸可选择厨房用纸，吸水性好且无碎屑。为保证微孔洗液浸泡时间一致，可采用从前至后和从后至前的顺序交替加洗液的方法。

  五、预实验的必要性

 　  1. 通过预实验可以熟悉整个实验的流程，发现可能忽略的问题；

2. 可以测试样本和试剂盒是否匹配，一旦出现不匹配的情况，不至于浪费过多样本；

3. 可以对样品中目的分析物的浓度作一下大致参考，以确定合适稀释度。

关注以上几个方面，希望对大家的ELISA检测工作起到一定的帮助。