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真菌毒素检测技术——赭曲霉毒素A篇

发布时间: 2019-10-14

真菌毒素检测技术——赭曲霉毒素A篇

1、 赭曲霉毒素A简介


      赭曲霉毒素(Ochratoxins)是一类由苯丙氨酸与异香豆素组成的结构类似的聚酮类化合物,它是由曲霉菌和青霉菌产生的真菌毒素,依其发现顺序分别称为赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)、赭曲霉毒素C(OTC)和赭曲霉毒素D(OTD)。其中毒性最大、分布最广的是赭曲霉毒素A。易存在于玉米、大豆、大麦、花生等谷物中。动物进食被赭曲霉毒素A污染的饲料后导致体内赭曲霉毒素A的蓄积,而且不易被代谢降解,因此动物性食品尤其是猪的肾脏、肝脏、肌肉、血液以及乳和乳制品中常有赭曲霉毒素A检出,在传统发酵食品中如豆酱、食醋中也被检出。
    赭曲霉毒素A主要通过竞争性取代苯丙氨酰-tRNA 合成酶催化反应中的苯丙氨酸来抑制相关蛋白质合成,同时也能通过脂质过氧化和自由基形成诱导氧化应激,从而导致疾病的发生。赭曲霉毒素A对人和动物具有肾毒性、致畸性、致癌性以及潜在的神经毒性等。


真菌毒素检测技术——赭曲霉毒素A篇


2、 赭曲霉毒素A的限量标准


    2017年10月,世界卫生组织国际癌症研究机构将赭曲霉毒素A归类在2B类致癌物清单中。欧盟对未加工谷物最高限量为5 μg/kg,谷物加工产品最高限量为3 μg/kg,葡萄酒及果酒中最高限量为2 μg/L。韩国对豆酱及其相关食品中赭曲霉毒素A 的最高限量为20 μg/kg。
    我国饲料卫生标准GB 13078-2017中规定配合饲料和青贮玉米中赭曲霉毒素A 含量不得超过100μg/kg。
    我国《GB2761-2017食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》对食品中赭曲霉毒素A的限量规定如下:

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3、 酶联免疫法检测赭曲霉毒素A


   
定量检测原理基于酶联免疫吸附测定(ELISA)。酶标板微孔包被有赭曲霉毒素A特异性抗体,赭曲霉毒素A标准品或样品以及赭曲霉毒素A-HRP酶结合物(检测溶液)加入包被有抗体的微孔中。赭曲霉毒素A -HRP酶结合物与标准品或样品中的赭曲霉毒素A竞争结合赭曲霉毒素A抗体。未结合的赭曲霉毒素A-HRP酶结合物在洗涤步骤中洗去。加入底物溶液后,产生蓝色物质。加入终止液终止反应,蓝色物质变成黄色。450nm下测定吸光值,吸收光的强度与样品和标准品中赭曲霉毒素A的浓度成反比。


真菌毒素检测技术——赭曲霉毒素A篇


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4、Symmetric 侧向层析试纸条检测赭曲霉毒素A


 定量侧向层析检测基于免疫层析测定原理。微孔中有耦合在胶体金上的赭曲霉毒素A抗体。在微孔中加入待测液,反复吹打形成悬浮混合液后开始孵育。在孵育过程中,赭霉毒素A(若存在)与胶体金抗体结合,达到抑制检测线显色的效果。将试纸条插入混合液中,液体沿试纸条垂直向上层析并层析至检测区(检测区内有控制线和检测线)。测试有效时,上方的控制线会显色。检测线的颜色深浅与样品中赭曲霉毒素A酮浓度成反比。通过使用 S-Flow 软件及对称定量技术可以准确测定赭曲霉毒素A的浓度。

 

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