在欧洲药典、美国药典以及ISO相关标准中，木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂广泛用于肠道致病菌的分离，其配方设计十分精妙，令人叹为观止。

XLD琼脂配方的妙处，在于综合运用糖发酵、赖氨酸脱羧、产H₂S等生化反应，再辅以各成分巧妙的配比，从而将沙门氏菌、志贺氏菌与非致病肠道菌区分开来。

从XLD的配方中可见（图1），细菌可利用的碳源是木糖、乳糖和蔗糖，其中木糖的含量相对较低，仅为乳糖和蔗糖的一半。培养基中所用的酸碱指示剂是酚红，其在酸性条件下显黄色，在碱性条件下显红色。此外，XLD也用硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵来检测H₂S，其原理是细菌在酸性条件下，将硫代硫酸钠还原并产生H₂S，H₂S与柠檬酸铁铵中的铁离子形成黑色的硫化亚铁沉淀。需要注意的是，当酸度太高时，因硫化亚铁分解，黑色沉淀的产生会减少。

一、肠道致病菌与非致病菌

志贺氏菌、沙门氏菌这些肠道致病菌，在XLD上显现为透明的粉红色至无色菌落。由于志贺氏菌不能发酵木糖、乳糖和蔗糖产酸，也不能使赖氨酸脱羧产碱，因此志贺氏菌在XLD上显现为透明的粉红色至无色菌落（图2）。

虽然沙门氏菌大多不发酵乳糖和蔗糖，但可迅速发酵木糖产酸，在XLD上最初显现为黄色菌落。然而，沙门氏菌还具有赖氨酸脱羧酶，还可分解赖氨酸产碱。而且由于培养基中木糖的含量相对较低，分解赖氨酸的产碱量最终会超过发酵木糖的产酸量，因此沙门氏菌在XLD上最终也显现为透明的粉红色至无色菌落。

非致病肠道菌，在XLD上显现为黄色菌落。绝大部分非致病肠道菌，既可发酵木糖，又能发酵乳糖和蔗糖，在XLD上显现为黄色菌落。虽然其中的一些大肠埃希氏菌和克雷伯氏菌也具有赖氨酸脱羧酶，可分解赖氨酸产碱。但是培养基中乳糖和蔗糖的含量较高，糖发酵的产酸量超过了分解赖氨酸的产碱量，这些菌在XLD上因此表现为黄色菌落（图3）。

需要指出的是，双相亚利桑那菌（沙Ⅲb）除了发酵木糖，大多也能发酵乳糖，糖发酵的产酸量较大，所以在XLD上也显现为黄色菌落。

二、沙门氏菌与志贺氏菌

大多数沙门氏菌可发酵木糖产酸，并在酸性条件下还原硫代硫酸钠产H₂S，H₂S与铁离子形成黑色的硫化亚铁沉淀。同时，沙门氏菌可分解赖氨酸产碱，并中和一部分糖发酵所产的酸，形成的低酸环境更有利于硫化亚铁沉淀的产生，所以XLD上沙门氏菌透明的粉红色至无色菌落，带有黑色且有光泽中心（图4）。

而志贺氏菌由于不产H₂S，在XLD上的菌落不具有黑色中心。需要提醒的是，甲型副伤寒以及一些猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌也不产H₂S，在XLD上的菌落也没有黑色中心。

三、沙门氏菌与奇异变形杆菌

某些变形杆菌和柠檬酸杆菌也可还原硫代硫酸钠产H₂S，特别值得一提的是奇异变形杆菌，该菌可发酵木糖和葡萄糖，但不发酵乳糖和蔗糖，而且还产H₂S，这些生化特性与沙门氏菌完全一致，所以其在XLD上的菌落形态与沙门氏菌很相似，此外，奇异变形杆菌在三糖铁琼脂上的反应也与沙门氏菌一模一样。因此，奇异变形杆菌常作为干扰菌，用于沙门氏菌检验项目的能力验证和盲样考核。

但是这些变形杆菌和柠檬酸杆菌由于没有赖氨酸脱羧酶，不能分解赖氨酸产碱，因此不能中和糖发酵所产的酸。由于高酸水平会导致部分硫化亚铁沉淀溶解，所以在XLD上菌落的中心呈现为灰黑色。XLD上变形杆菌和柠檬酸杆菌的菌落中心，没有沙门氏菌的菌落中心辣么亮，也没有辣么黑。

四、其他

为了排除革兰氏阳性菌的干扰，XLD中还添加了脱氧胆酸钠。值得注意的是，不同品牌XLD琼脂配方中，脱氧胆酸钠的含量、甚至是木糖的含量会略有不同，但这对沙门氏菌和志贺氏菌的分离并没有实质性影响。

另外，XLD琼脂无需高压灭菌，可通过煮沸消毒，但不宜过度加热，以免影响其选择性。制备好的XLD琼脂，在防止干燥的情况下，可在冰箱冷藏不超过4周。

主要参考文献：
1、Difco & BBL Manual.Manual of Microbiological Culture Media[M].BD Diagnostics,USA, 2009. 
2、Taylor W I. Isolation of shigellae I Xylose lysine agars: new media for isolation of enteric pathogens[J]. Am J Clin Pathol, 1965, 44(4):471-475.