你是否有这样的疑问，新购入的培养基，如何进行技术性验收来保证我们日常检测的结果？

答案是：根据GB4789.28-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》来对培养基和试剂进行验收。该标准涉及到非常多的培养基和试剂类别，今天先给大家介绍一下固体培养基的性能测试方法。

固体培养基的性能测试方法主要有两种：半定量和定量方法，其中，定量测试方法在GB4789.28新标准的征求意见稿中成为了主要测试方法，这次我们以平板计数琼脂PCA为例，为大家介绍非选择性固体培养基性能测试方法的操作及注意事项。

一、定量测试方法

1、操作步骤

1.1 根据培养基名称查附录D，获得质控菌株、质控指标和评定标准的相关信息；

1.2 将质控菌株接种到对应的非选择性肉汤中培养过夜；

1.3 将菌悬液浓度调整到每平板接种水平为20 CFU～200 CFU；

1.4 准备待测培养基平板，将菌液涂布于待测培养基上，同时涂布参比培养基^①；（也可用倾注法或螺旋涂布法操作）

1.5 培养后，计算参比培养基、待测培养基上的菌落数，计算生长率^②，再与附录D评定标准进行对比判断。

注：①参比培养基：一般细菌采用TSA，霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖琼脂，对营养有特殊要求的微生物采用适合其生长的不含抑菌剂或抗生素的培养基。

②生长率P_R：待测培养基平板上得到的菌落总数除以参比培养基平板上获得的菌落总数得出的数值。

2、注意事项

在整个操作过程中，步骤1.3菌悬液浓度调整为难点，今天将分享一下菌悬液调整的方法：

2.1 培养后的新鲜菌液可先估计浓度，如：常见的大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌培养后原始菌液浓度可达到1*10^8CFU/mL以上，枯草芽孢杆菌培养后可达到1*10^6CFU/mL以上；

2.2 再根据所需菌悬液进行梯度稀释，稀释时可以采用10倍梯度稀释法。

新鲜菌液浓度估算方法：因每个实验室的菌株活性和选择的复活的培养基等不同，原始浓度会存在一些差异，建议先做菌浓度的预估实验。如常见的大肠埃希氏菌ATCC25922接种到BHI过夜培养后菌液浓度约为10^8CFU/mL，对菌液进行梯度稀释后，选择10^-6 、10^-7两个稀释度进行计数，通过计算结果可得出新鲜菌液的浓度。以此数据作为该菌的原始浓度值。

二、半定量测试方法

1、操作步骤

1.1 查附录E，获得质控菌株、质控指标和评定标准的相关信息；

1.2 将质控菌株接种到对应的非选择性肉汤中培养过夜；

1.3 用1μL接种环进行平板划线（如下图所示）

1.4 培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，并计算生长指数G。

2、注意事项

• 使用1微升接种环（购买成品接种环），自己制作的接种环无法保证准确的接种量。

• 接种前菌液适度混匀，避免产生大量气泡，影响接种量。

• 接种环浸入培养基液面下1cm左右，沾一满环接种物，避免沾取表层气泡。

• 接种环与琼脂平板表面角度适宜，一般为20°-30°。

• 划线时力度与速度适宜，前后均匀并且连续。

• 可制作16条线模板置于平板底部，便于操作。

• 每个菌种接种2个平板，取平均值。

测试片的质控方法

在新发布的GB4789.2-2022《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》中，新增了测试片方法，在使用测试片时，应如何对其进行技术验收呢？

微生物测试片是一种特殊的培养基，它是以纸片、冷水可凝胶或无纺布等作为培养基的载体，用来检测食品中的微生物，考虑到其形式的特殊性，建议采用定量测试方法。

如果想了解到更多其他培养基验收方法，可关注“北京陆桥”公众号。