近期爱尔兰奶粉污染沙门氏菌的事件闹的人心惶惶，虽然爱尔兰政府后来发布公告表示未在任何爱尔兰配方奶粉生产厂家发现沙门氏菌，但我们也不能忽视对沙门氏菌的检验，婴幼儿的免疫系统较为脆弱，尤其是高度易感婴儿，比如早产儿、低出生体重婴儿、免疫缺陷婴儿等，一旦喂食了被沙门氏菌污染的婴幼儿配方乳粉，极易被感染致病，出现发烧、腹泻等肠炎症状，严重的可能会引发败血症，甚至死亡。

下面让我们温习一下GB4789.4-2016沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项。

预增菌

样品加入缓冲蛋白胨水（BPW）中进行预增菌，任何样品均需进行预增菌。有盆友问啦，为什么要用BPW呢？那是因为啊，食品在加工过程中采用加热、干燥等加工工艺使得细胞存在不同程度的受损，而缓冲蛋白胨水（BPW）呢，作为非选择性的增菌培养基，较高pH的缓冲体系可以帮助受损的细胞恢复到稳定、活力满满的生理状态，此处也可使用即用型的BPW，因为它操作方便，节省时间。

选择性增菌

这里要注意啦，增菌接种前一定要把预增菌后的BPW样品溶液轻轻摇动混匀，这样做的原因是有些沙门君是懒得动的（因为有些沙门氏菌没鞭毛），它们会潜伏在溶液底层，所以我们要把增菌液“摇摆、摇摆”，让不动的沙门君们在增菌液中都漂浮起来，吸出，分别接入TTB和SC培养基中。

此步骤防止漏检的方式是采用两种不同的选择性增菌液（TTB和SC）进行增菌，是因为沙门君的家族太庞大了，血清型都有2000多种，所以得加强引诱措施，采用不同的培养温度和不同抑制性的培养基来给不同的沙门君提供安逸的环境来繁衍后代，同时尽量阻拦革兰氏阳性菌和其他大多数的肠道菌来捣乱，有些细菌还是会趁虚而入的。

下面咱们来说一下TTB和SC使用过程中的注意事项：

TTB培养基：待基础培养基冷却至50℃以下时，加入煌绿和碘液，因为培养基中含有不溶解的CaCO₃（用来中和吸收有毒性的代谢物质），会有大量的白色沉淀，在分装时应边摇匀边分装，接种后培养条件为：42℃±1℃培养18h-24h；

SC培养基：千万不可高压灭菌，不可过度加热，最好是现用现配。发现干粉或溶液变红就不要使用了。培养基开封后建议用封口膜密封后冷藏保存，可延缓培养基变质，接种后培养条件为：36℃±1℃培养18h-24h；

增菌后的TTB与SC

分离

TTB与SC增菌液在接种选择性分离培养基前，均应轻轻摇动混匀，原因同选择性增菌一样，也是为了防止不运动的沙门氏菌漏检；混匀后，用直径为3mm的接种环（也就是实验室用的10μL接种环）将TTB与SC增菌液“分别”划线接种于两种选择性平板，一种是BS琼脂，为必选的选择性分离培养基，另外一种选择性分离培养基是从XLD琼脂、HE琼脂、沙门显色培养基中选择一个即可；沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征参考下图：

注意：在一种选择性琼脂培养基上不同沙门氏菌会长出不同的菌落形态，在做样品检验时要参考上图中沙门氏菌的菌落特征，将典型菌落及可疑菌落纯化后做生化和血清鉴定，避免漏检，例如：在XLD琼脂接菌培养18h-24h时，鼠伤寒沙门氏菌为粉红色菌落，呈现大的带光泽的黑色中心，大肠埃希氏菌为黄色菌落，猪霍乱沙门氏菌为淡黄色菌落，比大肠埃希氏菌的颜色略浅，易混淆，为防止漏检，XLD琼脂平板上黄色菌落也应做生化和血清鉴定，不可忽视。

下面咱们来说一下选择性琼脂培养基使用过程中的注意事项：

BS琼脂：配制时不可高压，煮沸灭菌即可，不可反复溶解，避免降低其选择性；特别需要注意的一点是必须使用前一天配制，且在48h内使用，超过48h也会降低其选择性，请于室温暗处贮存，接种后培养条件为：36℃±1℃培养40h-48h；

XLD琼脂：配制时不可高压，煮沸灭菌即可，不可反复溶解，避免降低其选择性，请于室温暗处贮存；该培养基宜于当天配置，第二天使用，接种后培养条件为：36℃±1℃培养18h-24h；

 HE琼脂：配制时不可高压，煮沸灭菌即可，不可反复溶解，避免降低其选择性；接种后培养条件为：36℃±1℃培养18h-24h；

沙门氏菌显色培养基：参考陆桥ESM005沙门氏菌显色培养基（SA）使用说明书。

好啦，咱们今天就先到这吧，关于沙门氏菌的生化和血清试验操作下篇文章再细细道来。