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真菌毒素检测技术——黄曲霉毒素M1篇

发布时间: 2019-07-16

 黄曲霉毒素M1简介

黄曲霉毒素1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。

黄曲霉毒素是黄曲霉菌(Asperillus Flavus)和寄生曲霉菌(Asperillus Parasiticus)的代谢产物之一,黄曲霉毒素M1主要存在于牛乳中,奶牛摄取了被黄曲霉毒素B1污染的饲料后,黄曲霉毒素B1在奶牛体内通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1,因而奶牛分泌的乳汁中含有黄曲霉毒素M1。黄曲霉毒素M1致癌性与AFB1大致相同,国际癌症研究机构将黄曲霉毒素M1列为1类致癌物。

真菌毒素检测技术——黄曲霉毒素M1篇

图1  AFB1转化成AFM1的反应式

 

黄曲霉毒素M1致癌机理:黄曲霉毒素M1远端呋喃环环氧结构与体内DNA嘌呤残基共价结合,造成DNA的损伤,引起DNA结构和功能改变,从而产生癌变。

黄曲霉毒素M1性质稳定,不被巴氏消毒破坏,高温或高压均无法破坏其结构,因此乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的污染则严重威胁着人类健康。


黄曲霉毒素M1的限量标准

中国与美国、日本一致,都是0.5µg/kg,欧盟成员国以及与欧盟有贸易的非洲、亚洲、拉丁美洲部分国家相对严格,为0.05µg/kg,而欧盟对婴幼儿配方食品,包括婴幼儿配方牛奶则限量0.025µg/kg。

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      3 酶联免疫法检测黄曲霉毒素M1

  定量检测原理基于酶联免疫吸附测定(ELISA)。酶标板微孔包被有AFM1特异性抗体,AFM1标准品或样品以及AFM1-HRP酶结合物(检测溶液)加入包被有抗体的微孔中。AFM1-HRP酶结合物与标准品或样品中的AFM1竞争结合AFM1抗体。未结合的AFM1-HRP酶结合物在洗涤步骤中洗去。加入底物溶液后,产生蓝色物质。加入终止液终止反应,蓝色物质变成黄色。450nm下测定吸光值,吸收光的强度与样品和标准品中AFM1的浓度成反比。


表1  Bio-Shield系列 黄曲霉毒素M1检测试剂盒

真菌毒素检测技术——黄曲霉毒素M1篇

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真菌毒素检测技术——黄曲霉毒素M1篇

图2 黄曲霉毒素M1 ES检测试剂盒

ILVO:比利时弗拉芒农业渔业和食品研究所,是欧洲最具盛名,最具有权威性的检测机构之一。


真菌毒素检测技术——黄曲霉毒素M1篇


   4 免疫金标快速试纸条检测黄曲霉毒素M1

定量侧向层析检测基于免疫层析测定原理。微孔中有耦合在胶体金上的AFM1特异性抗 体。在微孔中加入待测液,反复吹打形成悬浮混合液后开始孵育。在孵育过程中,黄曲霉毒素M1(若存在)与胶体金抗体结合,达到抑制检测线显色的效果。将试纸条插入混合液中,液体沿试纸条垂直向上层析并层析至检测区(检测区内有控制线和检测线)。测试有效时,上方的控制线会显色。检测线的颜色深浅与样品中AFM1浓度成反比。通过使用 S-Flow 软件及对称定量技术可以准确测定AFM1的浓度。


表2 Symmetric 黄曲霉毒素M1层析试纸条

真菌毒素检测技术——黄曲霉毒素M1篇

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