1、 呕吐毒素(DON)简介
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,简写为:DON)是一种单端孢霉烯族化合物。它主要来源于镰刀菌属,其中禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌是主要的产毒菌种。脱氧雪腐镰刀菌烯醇,与3-乙酰和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇,共同组成剧毒分子,被认为是造成免疫系统和神经系统疾病的重要因素。DON 毒素污染粮食的情况非常严重,许多粮谷类都会受到DON毒素的污染,如小麦、玉米、燕麦和大麦。被DON毒素污染的小麦更易发生小麦赤霉病,谷物的活力以及农产品的营养价值也很大程度降低,对农业经济造成严重的损失。由于DON 毒素性质稳定,一般的食品生产加工过程很难破坏其毒性,进入食物链后对人和动物的健康造成威胁。 DON 毒素具有很强细胞毒性,对生长较快的细胞例如淋巴细胞、胸腺细胞、骨髓造血细胞等均具有明显的毒性作用。人食用了被DON 毒素污染的食品后,主要表现为恶心、腹泻、呕吐等症状。而动物常有的症状为体重减轻、厌食。虽然它的毒性较同族其它真菌毒素小,但由于它广泛存在并大量污染粮食,对人畜构成很大危害。联合国粮农组织和世界卫生组织1973年联合召开的第三次食品添加剂和污染物会议上,单端孢霉烯族毒素被定为最危险的自然发生食品污染物。列入国际研究的优先地位。世界上绝大多数政府对人类及动物食物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量制定了严格的限定。因此,准确快捷地检测出商品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇旳含量极其重要。
图1 呕吐毒素结构图
2、呕吐毒素(DON)的限量标准 根据《食品中真菌毒素限量》(GB 2761-2017)标准: 规定谷物及其制品中的呕吐毒素(DON) 的限量为1000μg /kg。
3、酶联免疫法检测呕吐毒素(DON) 定量检测原理基于酶联免疫吸附测定(ELISA)。酶标板微孔包被有DON特异性抗体,DON标准品或样品以及DON-HRP酶结合物(检测溶液)加入包被有抗体的微孔中。DON-HRP酶结合物与标准品或样品中的DON竞争结合DON抗体。未结合的DON-HRP酶结合物在洗涤步骤中洗去。加入底物溶液后,产生蓝色物质。加入终止液终止反应,蓝色物质变成黄色。450nm下测定吸光值,吸收光的强度与样品和标准品中DON的浓度成反比。
4、免疫金标快速试纸条检测呕吐毒素DON 定量侧向层析检测基于免疫层析测定原理。微孔中有耦合在胶体金上的DON特异性抗 体。在微孔中加入待测液,反复吹打形成悬浮混合液后开始孵育。在孵育过程中,DON(若存在)与胶体金抗体结合,达到抑制检测线显色的效果。将试纸条插入混合液中,液体沿试纸条垂直向上层析并层析至检测区(检测区内有控制线和检测线)。测试有效时,上方的控制线会显色。检测线的颜色深浅与样品中DON浓度成反比。通过使用 S-Flow 软件及对称定量技术可以准确测定DON的浓度。
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