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真菌毒素检测技术——伏马毒素篇

发布时间: 2019-11-25

真菌毒素检测技术——伏马毒素篇



1. 伏马毒素简介


伏马毒素(Fumnosins)是由串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)、轮状镰刀菌(Fusarium verticillioides)等在合适的环境下生成的次级代谢产物。因镰刀属真菌是污染玉米、高粱、小麦等农作物的优势菌种,故伏马毒素可通过食物链传播影响人和动物的健康。1998年,Gelderblom首次从串珠镰刀菌培养液里分离获得伏马毒素,时至今日,已鉴定出28种不同的异构体。伏马毒素均为结构类似的双酯化合物,直链骨架含有19或20个碳原子,各种羧、羟基、酯键分布在骨架两侧。到目前为止,发现的伏马菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11种,其中伏马毒素B1(FB1)是其主要组分。FB1对食品污染的情况在世界范围内普遍存在,主要污染玉米及玉米制品。FB1为水溶性霉菌毒素,对热稳定,不易被蒸煮破坏,所以同黄曲霉毒素(AFT)一样,控制农作物在生长、收获和储存过程中的霉菌污染仍然是至关重要,伏马毒素可以通过粮食加工、饲料生产等过程对畜牧业乃至人类健康产生较严重的危害。

真菌毒素检测技术——伏马毒素篇

图1 伏马毒素B1结构式


2. 伏马毒素的限量标准


2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考,伏马毒素B1、串珠镰刀菌及其产生的毒素(伏马毒素B1、伏马毒素B2和镰刀菌素C)在2B类致癌物清单中。

我国饲料卫生标准GB 13078-2017中饲料原料和饲料产品中伏马毒素的含量规定如下:


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3. 酶联免疫法检测伏马毒素


定量检测原理基于酶联免疫吸附测定(ELISA)。酶标板微孔包被有伏马毒素特异性抗体,伏马毒素标准品或样品以及伏马毒素-HRP酶结合物(检测溶液)加入包被有抗体的微孔中。伏马毒素-HRP酶结合物与标准品或样品中的伏马毒素竞争结合伏马毒素抗体。未结合的伏马毒素-HRP酶结合物在洗涤步骤中洗去。加入底物溶液后,产生蓝色物质。加入终止液终止反应,蓝色物质变成黄色。450nm下测定吸光值,吸收光的强度与样品和标准品中伏马毒素的浓度成反比。


真菌毒素检测技术——伏马毒素篇


真菌毒素检测技术——伏马毒素篇

图2  B2896伏马毒素试剂盒


4.Symmetric 侧向层析试纸条检测伏马毒素


定量侧向层析检测基于免疫层析测定原理。微孔中有耦合在胶体金上的伏马毒素抗体。在微孔中加入待测液,反复吹打形成悬浮混合液后开始孵育。在孵育过程中,伏马毒素(若存在)与胶体金抗体结合,达到抑制检测线显色的效果。将试纸条插入混合液中,液体沿试纸条垂直向上层析并层析至检测区(检测区内有控制线和检测线)。测试有效时,上方的控制线会显色。检测线的颜色深浅与样品中伏马毒素浓度成反比。通过使用 S-Flow 软件及对称定量技术可以准确测定伏马毒素的浓度。


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3  S-FLOW读数仪


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