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真菌毒素检测技术——T-2毒素篇

发布时间: 2020-02-12

真菌毒素检测技术——T-2毒素篇


1.T-2毒素简介


T-2毒素和HT-2毒素属于单端孢霉烯族毒素,该族毒素种类接近190种。根据该毒素化学结构中C3和C15之间是否存在大环,以及羟基和乙酸基数量,可以分为A、B、C、D共4类。T-2毒素是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种真菌毒素,HT-2毒素为T-2毒素在体内与体外最为主要的代谢产物,二者在自然界中分布广泛。此外,T-2毒素和HT-2毒素还可存在于各类谷物、人类食品、动物饲料及动物制品中。T-2毒素可以通过污染饲料对家畜造成危害,引起动物拒食、呕吐、腹泻、胃肠道出血等症状。T-2毒素具有很强的免疫毒性,感染动物后可引起免疫机能下降。

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图1  T-2毒素结构式



2. T-2毒素的限量标准

 

我国饲料卫生标准GB 13078-2017中饲料原料和饲料产品中T-2毒素的含量规定如下:

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3.酶联免疫法检测T-2毒素


定量检测原理基于酶联免疫吸附测定(ELISA)。酶标板微孔包被有T-2毒素特异性抗体,T-2毒素标准品或样品以及T-2毒素-HRP酶结合物(检测溶液)加入包被有抗体的微孔中。T-2毒素-HRP酶结合物与标准品或样品中的T-2毒素竞争结合T-2毒素抗体。未结合的T-2毒素-HRP酶结合物在洗涤步骤中洗去。加入底物溶液后,产生蓝色物质。加入终止液终止反应,蓝色物质变成黄色。450nm下测定吸光值,吸收光的强度与样品和标准品中T-2毒素的浓度成反比。


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图2  B4196 T-2毒素试剂盒



4. Symmetric 侧向层析试纸条检测T-2毒素


定量侧向层析检测基于免疫层析测定原理。微孔中有耦合在胶体金上的T-2毒素抗体。在微孔中加入待测液,反复吹打形成悬浮混合液后开始孵育。在孵育过程中,T-2毒素(若存在)与胶体金抗体结合,达到抑制检测线显色的效果。将试纸条插入混合液中,液体沿试纸条垂直向上层析并层析至检测区(检测区内有控制线和检测线)。测试有效时,上方的控制线会显色。检测线的颜色深浅与样品中T-2毒素浓度成反比。通过使用 S-Flow 软件及对称定量技术可以准确测定T-2毒素的浓度。


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图3  S-FLOW读数仪


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