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浅谈微生物检测中的分子生物学

发布时间: 2020-01-17

俗语说:“外行看热闹,内行看门道”。咱们大部分人在谈及分子生物学这五个大字的时候,都会觉得高深莫测,深奥难懂,其实这种神秘只是针对科研领域而言,对于我们微生物检测领域,倒没有多少值得我们仰止的东西。今天,就让小王带你揭开这层神秘的暗纱!

分子生物学是近代的产物,自1953年,沃森和克里克提出DNA分子的双螺旋结构模型,标志着分子生物学诞生。因为分子生物学大多数是在DNA层面上展开研究的,那咱就先说下DNA:


浅谈微生物检测中的分子生物学

上图就是DNA的照片,当然,这是模拟的,里面的球球(核糖)和棍棍(碱基,PCR中的原料)就是组成DNA的材料。它的大名就叫做:脱氧核糖核酸!而DNA就是决定生物表型的内在因素,比如大家熟知的同卵双胞胎,就是因为DNA高度相似,这也是当下亲子鉴定运用的主要依据。

又要有人问小王了,你一直在说DNA,那基因又是啥呢,DNA和基因是一回事儿不?

 通俗的讲,DNA上包含很多基因,而基因只是DNA中的一个有效片段。就好比DNA是一条马路,而基因则是这条马路上的一个又一个站点。而生物的表型也是通过基因的形式来表现的。就像上面提到的同卵双胞胎,也不是完全一样,不一样的地方就是因为相关的基因不一样。


因此,大家可以看出,基因是代表一个物种所独有的物质,是特异性的,单独存在的,所以,基因层面的分析也往往用来对未知的物种进行鉴定,特别是咱们微生物检测领域,每个菌株的种属间都有其特殊存在的基因,而我们只需要看未知菌株是否含有某个基因,就可以确定其是否为该菌属。比如,新修订的《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》中就推出了PCR的方法,运用PCR技术对可疑菌进行鉴定,看其是否含有致泻大肠埃希氏菌的毒力基因,又是属于哪种毒力基因来进行鉴定。


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大家又要问小王了,什么是PCR呢?

PCR从定义上是叫做聚合酶链式反应,其实也可以认定为是一种生化反应过程,是指在特定的条件下,运用聚合酶合成DNA的一种手段。那为什么要用PCR呢?下面就给大家举个例子就知道了:

在样品检测中我们往往要进行增菌,增菌的目的一是为了富集,便于检测,二就是微生物太小,我们肉眼是看不到的,而增菌后就方便用肉眼观察。划平板划出单菌落也是同样的道理。而DNA更是微小不可见,运用PCR技术扩增后就可以用琼脂糖凝胶电泳技术让肉眼可以观察到,也方便鉴定。


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而在我们日常监测工作中经常还会用到比普通PCR更进一步的方法:荧光定量PCR。从原理上讲,普通PCR和荧光定量PCR在微生物检测中检测的基因是一致的,只是采用的方法不一样。二者的区别在于,普通PCR需要借助凝胶成像系统进行观察,而荧光定量PCR可以通过仪器连接的电脑直接观察扩增曲线。相对来讲,荧光PCR的操作更方便简单些,但设备费用较高,而普通PCR需要扩增和电泳后染色,才能借助成像系统观察,较为麻烦。

不论是普通PCR和荧光PCR,在其反应过程中,聚合酶的作用至关重要,其常规保存于-20℃,这就给成品试剂盒的运输带来了麻烦,必须干冰运输才能保证试剂盒的效果。

而北京陆桥的MX系列PCR产品,采用国际上先进的冻干预混技术,将聚合酶和其他反应物质预先冻干于反应管内,大大改善了产品的稳定性,也使得冷藏甚至常温运输变成了可能。又由于是预混液冻干,两步操作即可上机,避免了人员在微量加液过程中的误差,使我们的检测过程更加稳定可靠!


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