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1. 介绍
牛奶中的黄曲霉毒素 M1 被认为是剧毒物质，国际癌症机构将黄曲霉毒素M1列入一类致癌物清单中，欧盟规定其限量为0.05μg/kg。黄曲霉毒素M1可通过侧向层析试纸条进行快速检测，并通过 ELISA 进行定量，检测时间至少为15分钟和90分钟。由于免疫层析技术中免疫化学的局限性，为实现欧盟限量中的高灵敏度造成了障碍。因此，ELISA 检测方法仍然是黄曲霉毒素 M1 定量筛选最可靠的方法。
2. 研究目的
此研究的目的是对比一种创新的免疫层析检测和 ELISA 方法对牛奶样品中黄曲霉毒素M1的定量检测能力。
3. 研究方法
指示型侧向层析试纸条由高亲和力单克隆抗体、结合胶体金、一条化学修饰的半抗原测试线和一条抗体对照线组成。抗黄曲霉毒素 M1 使用正在申请专利的O.H.C.M.I.T 技术生产（半抗原载体摩尔浓度优化型免疫原性技术）。在小鼠免疫接种和杂交瘤制备完成后，筛选克隆并使用蛋白 G 柱纯化。基于这些特异性抗体，创建了对称型黄曲霉毒素M1侧向层析测试产品（Symmetric M1），这款竞争性免疫测定产品，仅需10分钟即可完成检测，且样品无需前处理。黄曲霉毒素M1的浓度由量化系统 S-Flow 分析得出。S-Flow系统使用新型对称量化技术，正在申请专利。扫描系统由 Lateral Logic有限公司提供。用于侧向层析试纸条测定的所有样品（产品信息：Symmetric M1黄曲霉毒素检测试纸条，S2196，批号S2196006，由 Prognosis Biotech S.A.股份有限公司提供）同时使用 ELISA 试剂盒进行测定（产品信息：Bio-Shield M1 ES，B2096，批号B2096040，由Prognosis Biotech S.A. 股份有限公司提供）。
4. 研究结果
此研究中的 ELISA 试剂盒使用受控包被工艺，抗体具有稳定的结合活性和较高特异性的特点，具有低基质效应和较优的回收水平。在 2013-2017年多次奶或奶酪环测试（Ring Test）结果中，Z分数的平均值为-0.0087（图1）。
图1: 2013-2017 年度奶或奶酪环测试中 Z 分数水平
在均质牛奶（CHM），牛奶原奶（CRM），山羊奶原奶（GRM）和绵羊奶原奶（SRM）四种奶样品中添加五种不同水平浓度的 AFM1（12.5、25、37.5、50、75ppt）作检测分析，结果发现每种奶样品在 ELISA和侧向层析检测中的回收率平均值几乎相同。具体来看，ELISA检测的平均回收率分别为97.6%、98.4%、102.5%和100.7%，侧向层析检测分别为97.9%、97.5%、97.3%和 98.0%（图2）。
图2: ELISA和侧向层析对不同样品中添加不同浓度黄曲霉毒素M1检测的回收率水平
以上结果通过检测上述样品中不同浓度的黄曲霉毒素 M1（表1）和参考物质（图3）得到证实。2017年在AIA 环测试中（注 AIA:意大利育种协会，管理意大利所有肉产品和奶产品的生产）对乳制品中黄曲霉毒素M1检测，Bio-Shield M1 ELISA试剂盒（61号）和Symmetric M1侧向层析试纸条（98号）分别在99个参加者中排名第2（Z分数：0.04）和第5（Z分数：0.2）（表2）（图4）。在5名侧向层析试纸条参加者中，Symmetric M1 排名第1（图5）。
图3: ELISA 和侧向层析检测参考物质的回收率水平
表 1: 相对偏差(%) (ELISA结果(ppt)/侧向层析结果(ppt)
表2: 2017年9月乳品中黄曲霉毒素M1 AIA 环测试结果RT M1 260917
图4: 2017年9月乳品中黄曲霉毒素M1 AIA 环测试RT M1 260917 所有参加者 Z-分数结果
图5: 2017年9月黄曲霉毒素M1 AIA环测试RT M1 260917中侧向层析参加者 Z-分数
高亲和力抗体和高级定量系统的结合有助于获得较大范围的标准曲线。根据扫描设备的结果，ELISA 和侧向层析试纸条的曲线图以及回收率水平几乎相同。
5. 结论
该创新的对称型侧向层析方法是检测乳制品中黄曲霉毒素 M1快速定量检测方法中最准确的工具，其结果可与定量 ELISA 结果相媲美。
2018年8月 Bio-Shield M1 ES试剂盒及Symmetric M1定量试纸条通过ILVO验证（ILVO: Flanders research institute for agriculture, fisheries and food. Technology and Food Science unit, Belgium.比利时弗拉芒农业渔业和食品研究所，被誉为欧洲的AOAC）。
ILVO 研究报告
S-Flow 分析系统