克罗诺杆菌的危害

克罗诺杆菌是一种条件致病菌，高风险人群主要是婴幼儿，特别是早产儿、低出生体重儿和免疫力低下人群，可引起严重的坏死性小肠结肠炎、菌血症和脑膜炎等疾病，死亡率高达40%~80%。

因为该菌的强致病性、高死亡率以及易感人群的特殊性。所以，婴幼儿配方食品中克罗诺杆菌属检测是非常重要且必不可少的检测项目。国内外相关食品安全标准均明确规定婴幼儿配方食品中不得检出克罗诺杆菌属。

为何进行黄色素实验？

在克罗诺杆菌属检测中，黄色素实验一直是非常重要的鉴定步骤，后续生化也是在产黄色素的基础上进行的。

黄色素实验之所以重要，要从克罗诺杆菌属的命名史说起。1980年之前根据生化反应和产生黄色素等特征该菌被认为是产黄色素的阴沟肠杆菌；1980年命名为阪崎肠杆菌；2008年划分为独立的新属克罗诺杆菌属。所以，一直以来黄色素实验都作为克罗诺杆菌属鉴定的重要依据。

黄色素实验特殊的培养温度

GB4789.40-2016《食品安全国家标准  食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌) 检验》中要求，从显色培养基挑取可疑菌接种TSA平板，25℃±1℃ 培养48h±4h。挑取黄色可疑菌落进行后续鉴定。

黄色素实验的培养温度有别于其他步骤的培养温度，因为在25℃±1℃培养条件下更利于黄色素的产生。

下面我们用克罗诺杆菌属的标准菌株及样品分离株对培养温度进行验证。菌株划线TSA平板分别置于25℃及36℃培养48h，观察黄色素产生情况。

实验结果如下图所示：

从实验图片可以得出结论：36℃培养48h菌落生长更大，但是多数菌株黄色素的产生比25℃培养48h要差。有些菌株差异不大。因此，进行黄色素实验时，TSA平板需要放置于25℃±1℃进行培养。

通过实验不仅可以看到不同培养温度对于黄色素产生的影响；也可以看到即便是25℃进行培养，不同菌株产生的黄色素也不完全一致。颜色深浅差异很大，有些菌株甚至基本不产生黄色素。而且国外的研究也发现, 近 8%的克罗诺杆菌属不产黄色素。如果只依据黄色素来决定后续是否进行生化鉴定，很容易造成假阴性。

所以，《ISO 22964：2017 Microbiology of the food chain-Horizontal method for the detection of Cronobacter spp》标准中，TSA平板上黄色素观察不再作为生化鉴定的项目。

综上所述，在进行克罗诺杆菌属检测时，如果显色培养基上菌落典型，即便TSA上黄色素不明显也建议进行生化鉴定。最终根据生化鉴定结果进行综合判定。

参考文献

1、GB4789.40-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌) 检验

2、ISO 22964: 2017 Microbiology of the food chain-Horizontal method for the detection ofCronobacter spp.

3、万志刚，吕敬章，赵琳娜，等.α-葡萄糖苷酶试验在克罗诺杆菌鉴定中的应用[J]. 食品安全质量检验学报,2009,10(16) :5432~5435

4、Iversen C, Lehner A, Mullane N, et al. Identification of 'Cronobacter' spp.(Enterobacter sakazakii) [J]. J Clin Microbiol, 2007, 45(11): 3814-381