引言

经过层层剥离，迷雾终将散去，光明即将到来。

我们还需要两件工具，生化鉴定和血清学鉴定。

它们会帮我们鉴别黑白。

真相永远只有一个！

一、纯化和生化鉴定

国标流程要求从选择分离平板上挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁、赖氨酸和营养琼脂，如果三糖铁、赖氨酸结果不能排除，那些再做其他生化。这里最大的困难是一个单菌落不够接种三种培养基。而且初筛的作用有限，表中能排除的两项，菌落在平板上都不是最典型的沙门氏菌特征。

所以我们建议第一天先纯化，第二天用纯化后的菌将所有生化一起做。时间上与国标一样，都是两天得到完整生化结果，但是菌经过了纯化，排除了选择分离平板对生化的干扰，又获得了大量单菌落，既能满足生化试验的用菌量，也能挑菌做血清。

操作顺序明白后，我们再来理一下试验思路。

国标条款5.4.2.1反应序号A1:典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。

根据上述这段话，我们理解表4所列的就是尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常的组合，那么表4的硫化氢和靛基质应该与A1中一致。所以我们将表3和表4合并，再把表4补充完整，就可以得到下表。

我们自己做生化鉴定时，如果出现上表中的组合，那么就按判定结果进行补充生化试验即可。

如果不符合上表中任何一种组合，那么直接判非沙门氏菌。

如此一来，沙门氏菌生化鉴定的思路就简化了。

另外，表4第二行组合需要补充一些群生化，目的是看这株菌到底属于哪个群。这里的群其实是沙门氏菌分类的亚属。如果遇到了，补齐下表生化即可。

我们目前常见菌做生化的情况如下：

ATCC14028 鼠伤寒沙门氏菌，生化结果符合A1组合。

ATCC13076 肠炎沙门氏菌，生化结果符合A1组合。

CMCC50071 伤寒沙门氏菌，生化结果符合A1组合。

ATCC10708 猪霍乱沙门氏菌，生化结果符合A3组合，A3的补充试验ONPG也为阴性。

ATCC12325 双相亚利桑那，生化结果符合A1组合。

ATCC25922 大肠埃希氏菌，生化结果硫化氢与靛基质不符合A1组合，故判非沙门。

CMCC49005 奇异变形杆菌，生化结果赖氨酸与尿素不符合A1组合，故判非沙门。

从上述不同菌的生化能看出，选择分离平板中常见的干扰菌在生化层面几乎都被排除。大肠埃希氏菌通过硫化氢和靛基质排除；奇异变形杆菌通过赖氨酸和尿素排除。所以生化鉴定的效果还是很好的，不过依然有一些情况需要用血清学进行辅助判定。

二、血清学鉴定

关于血清学有几点需要明确：

1、血清学在鉴定方面只是生化鉴定的辅助，血清学主要的作用在于沙门氏菌的分型。

2、血清学鉴定（主要是多价血清的鉴定）是沙门氏菌鉴定的重要部分，无论生化鉴定结果如何，血清学试验都必须完成。

3、血清学分型在此国标中是选作项目，而且内容较为复杂，我们不做赘述。我们重点介绍多价血清的鉴定。

首先我们来认识一下沙门氏菌常见的三种抗原，O抗原、H抗原和Vi抗原。

O抗原是菌体抗原，为细胞壁脂多糖中特异性多糖部分，以阿拉伯数字顺序排列。每个沙门氏菌血清型含一种或多种O抗原。基本每一个沙门氏菌都会有O抗原。

H抗原是鞭毛抗原，有鞭毛就会有动力，所以大部分沙门氏菌都有H抗原，只有鸡雏沙门氏菌是没有鞭毛的，也就没有H抗原。H抗原分第Ⅰ相和第Ⅱ相两种。第Ⅰ相特异性高，以a，b，c。。。。表示。第Ⅱ相特异性低，可为多种沙门氏菌共有，以1，2，3。。。。。表示。同时拥有两个相的沙门氏菌称双相菌。

Vi抗原是一种表面抗原。只有少数沙门氏菌才有，比如伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌等。Vi抗原可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反应。Vi抗原不稳定，可通过加热破坏。

做血清试验时最好每步都带上自凝试验，即可以观察自凝，也可以做为阴性对照（一般都不会自凝），试验的操作流程如图所示：

备注：

1、上述流程只涉及了多价凝集试验，不涉及H抗原分型试验。

2、热处理一般建议，将菌做成浓菌液于沸水浴中煮沸15-60min，之后再进行O多价凝集试验。

3、当H多价不凝集时应考虑菌活力是否不足，以及是否经过了半固体平板培养让鞭毛伸展。

血清学操作视频：

O多价凝集试验和H多价凝集试验：

三、结果与报告

综合以上生化试验和血清学鉴定的结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。

沙门的迷雾就此破除，阳光再次照耀大地。

希望本文能对大家有帮助！