灭菌，既是微生物测试的基础，也是无菌产品生产的核心工艺环节，其效果验证十分重要！
我们常用的湿热灭菌，其效果验证主要由物理确认和生物学确认两部分构成。
生物学确认则主要是微生物挑战试验，该实验是将一定量、已知特性值的耐热芽孢（即生物指示剂）在设定的湿热灭菌条件下进行灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实能使产品达到预定的无菌保证水平。
最终生物指示剂被杀灭的程度，是评价一个灭菌程序有效性的直观指标。
今天我们就给大家简单介绍一下生物指示剂。
一种对特定灭菌程序有确定及稳定耐受性的特殊活微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认，特定物品的灭菌工艺研发、建立、验证，生产过程灭菌效果的监控 ，也可用于隔离系统和无菌洁净室除菌效果的验证评估等。（——源自《中华人民共和国药典2020年版 四部》中的1421 灭菌法、9207灭菌用生物指示剂指导原则）
1、载体型生物指示剂：
由微生物芽孢和载体经包装而成；
2、芽孢悬液生物指示剂：
芽孢混悬于液体中；
3、自含式生物指示剂：
芽孢和能够恢复微生物生长的培养基系统组成。
芽孢悬液生物指示剂，例如安瓿式生物指示剂，主要用于湿热灭菌的液体灭菌验证，置于液体中进行使用。
自含式生物指示剂主要用于湿热灭菌中饱和蒸汽灭菌的验证，需与被灭菌物品—起置于灭菌舱内进行使用。例如，检测实验室常用手提式或立式的蒸汽高压灭菌锅对培养基、试剂及实验用具进行灭菌，其灭菌效果需定期使用自含式生物指示剂进行验证。
![灭菌效果验证之生物指示剂]( "灭菌效果验证之生物指示剂")
安瓿式生物指示剂
![灭菌效果验证之生物指示剂]( "灭菌效果验证之生物指示剂")
将生物指示剂数支分别放在灭菌器内不易被灭菌完全的位置；
按规定的灭菌温度（例如121℃±1℃）和时间（例如15min）进行灭菌处理；
安瓿式生物指示剂：
将生物指示剂垂直放入56℃±1℃ 培养箱内培养，同时取一支未经灭菌的指示剂，同步放入培养箱培养作为阳性对照管，同时培养48h，观察结果。
自含式生物指示剂：
垂直挤压塑料管压破管内的玻璃管（内装紫色液体培养基），使菌片完全浸没在培养基中；
将生物指示剂垂直放入56℃±1℃ 培养箱内培养，同时取一支未经灭菌的指示剂，同上处理，同步放入培养箱培养作为阳性对照管，同时培养48h，观察结果。
A. 培养后当生物指示剂管内培养液由紫色变为黄色，即表示有菌生长，判定灭菌不合格；
B. 培养后当生物指示剂管内仍为紫色表示无菌生长，阳性对照培养液由紫色变为黄色，判定为灭菌合格。
生物指示剂主要性能指标为：菌种及其纯度、总孢子数、D值、存活时间、杀灭时间。
● 总孢子数：生物指示剂芽孢含量应在90%以上，湿热灭菌生物指示剂的芽孢数范围一般在1.0×105〜5.0×106CFU。（依据中国药典2020版四部9208进行检测）
● D值：即微生物的耐热参数，是指一定温度下，将试验微生物杀灭90%所需的灭菌时间或灭菌剂量。
▲一般以时间（分）表示。D值越大，表明该微生物的耐热性越强。
▲灭菌方法验证时，微生物的耐热参数一般使用D121℃。
▲D值需要特定的设备（抗力仪或油浴仪）方可测定。
● 存活时间：将生物指示剂暴露于灭菌条件下一定时间（尽可能长时间）后，使所有生物指示剂培养结果均为阳性。
● 杀灭时间：将所有生物指示剂暴露于灭菌条件下一定时间(尽可能短时间)后,使所有生物指示剂培养结果均为阴性。
F值又称杀菌值，由于微生物的种类和温度均为特指，通常F值要采用上下标标注，以便于区分。一般将标准杀菌条件下的F值记为在121℃热力致死温度下腐败菌的热力致死时间，用F0值表示。
yh533388银河(China)官方网站为 KINTEK 灭菌生物指示剂总代理，KINTEK灭菌指示剂系列产品适用于制药、化妆品、食品等工业领域和各种检测机构。产品生产符合《消毒技术规范》、GB18281、ISO13485、《中国药典》、EP、USP等法规要求，产品种类齐全、质量稳定，并支持不同灭菌条件的非标定制。
![灭菌效果验证之生物指示剂]( "灭菌效果验证之生物指示剂")
用途：121℃压力蒸汽灭菌过程及效果监测
菌种：ATCC 7953 嗜热脂肪芽孢杆菌（G. Stearothermophilus）
芽孢含量：5.0×105～3.0×106 CFU/ 支
北京陆桥为您提供多种指示剂类产品，欢迎您的关注和来电咨询相关产品！
1. 中华人民共和国药典2020年版 四部[S].
2. 化学药品注射剂灭菌和无菌工艺研究及验证指导原则[S].
3. GB 18281.1~3-2015 医疗保健产品灭菌 生物指示物[S].
4. GB/T 19972-2018医疗保健产品灭菌 生物指示剂选择、使用和结果判断指南[S].
5. GB/T 24628-2009 医疗保健产品灭菌 生物与化学指示物 测试设备[S].