恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌。有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼。恶臭假单胞为专性需氧菌，广泛存在于土壤和水中。

在GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》铜绿假单胞检测项目中，要求定期使用恶臭假单胞菌作为阴性对照菌对整个检验过程进行质量控制。

今天我们就通过实验详细介绍一下恶臭假单胞的菌株活化及生化特性等。

一、恶臭假单胞菌菌株活化

菌株活化一定要选择合适的培养条件才能够保证微生物的生长。《伯杰细菌鉴定手册》中表明恶臭假单胞菌最适生长温度为25℃-30℃。ATCC（美国菌种保藏中心）给出的菌株活化说明中，培养温度为30℃；CICC（中国工业微生物菌种保藏中心）菌种说明中要求培养温度为28℃。

我们将菌株接种到营养琼脂平板和BHI（脑心浸液培养基）中分别置于36℃和28℃培养箱中培养24h。经实验发现，恶臭假单胞菌在36℃也可以生长，但比28℃生长弱一些。所以在菌株活化时，为保证菌株良好生长建议25℃-30℃进行培养。

二、恶臭假单胞菌的生物学特性

在GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》铜绿假单胞检测项目中，恶臭假单胞菌为阴性对照菌，铜绿假单胞菌为阳性对照菌。那么恶臭假单胞菌生物学特性是什么？与铜绿假单胞菌又有何区别？我们通过实验现象来进行了解。

1）假单胞CN琼脂

将活化好的菌株接种假单胞CN琼脂，36℃培养24h。平板上铜绿假单胞为蓝绿色菌落，而恶臭假单胞为无色菌落。将平板置于366nm紫外灯下观察荧光，铜绿假单胞有荧光，恶臭假单胞无明显荧光。

2）绿脓菌素测试

将菌株接种到绿脓菌素测定培养基上，３６℃±１℃培养２４ｈ±２ｈ，加入三氯甲烷３ｍＬ～５ｍＬ，可捣碎培养基并充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于三氯甲烷，待三氯甲烷提取液呈蓝色时，用吸管将三氯甲烷移到另一试管中，并加入１mol／Ｌ的盐酸１ｍＬ，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性。

铜绿假单胞菌绿脓菌素实验为阳性，恶臭假单胞菌为阴性。

3）产胺实验

将菌株接种至乙酰胺液体培养基中，在３６℃±１℃下培养２０ｈ～２４ｈ。然后向每支试管培养物加入１滴～２滴钠氏试剂，１0ｓ内检查各试管的颜色变化，如表现出从黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。

铜绿假单胞菌产胺实验为阳性，恶臭假单胞菌为阴性。

4）42℃生长实验

将菌株接种营养琼脂平板上或者42℃生长试验生化管中，４２℃±１℃ 培养２４ｈ～４８ｈ，能生长为阳性结果，否则为阴性。

铜绿假单胞菌42℃生长实验为阳性，恶臭假单胞为阴性。

5）氧化酶实验

取２滴～３滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。 将菌株纯培养物涂布在预备好的滤纸上。在１０ｓ内显深蓝紫色的视为阳性反应。 

铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌氧化酶实验均为阳性。

6）金氏B培养基产荧光实验

将菌株接种于金氏Ｂ培养基３６℃±１℃恒温箱培养１ｄ～５ｄ。每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光，将５ｄ内产生荧光的菌落记录为阳性。

铜绿假单胞菌产生荧光为阳性，恶臭假单胞菌不产荧光为阴性。

综合以上实验结果，铜绿假单胞菌和恶臭假单胞菌在培养基上的菌落形态以及主要生化反应结果汇总如下：

参考文献：

1、GB 8538-2022《食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法》

2、《伯杰细菌鉴定手册》【M】，科学出版社，布坎南（R.E.Buchanan）等编，1984

点击下方链接，查看GB 8538-2022检测产品列表

GB 8538-2022检测产品列表